Действует с 1 сентября 2021 г.
Приложение
Срок действия
Действует до 1 сентября 2027 г. (п. 2 приказа). С 1 сентября 2027 г. не действует. Открыть документ на 01.09.2027 →
Ниже текст действующей редакции.
Критерии эффективности методики идентификации ГИМР
| № | Характеристика | Описание характеристики | Критерий | Методы оценки критерия |
| 1 | Специфичность ПЦР | Способность ПЦР- тест-системы выявлять только целевую ДНК | ПЦР-тест-система должна выявлять целевую ДНК. ПЦР-тест-система не должна давать ложноположительных результатов, в том числе выявлять ДНК близкородственных и неродственных биологических видов, в 100% проводимых исследований | Для оценки специфичности используются контрольные панели образцов. В состав панели должны входить образцы, содержащие целевую ДНК и не содержащие целевую ДНК |
| 2 | Чувствительность ПЦР | Наименьшее содержание копий целевой ДНК, которое может быть определено с использованием данной ПЦР- методики в зависимости от свойств используемых праймеров и зондов | Чувствительность должна быть не ниже 100 копий целевой ДНК в одной ПЦР-реакции | Проводятся исследования ряда десятикратных разведений целевой ДНК с известной концентрацией в двух повторах каждое. Определяется максимальное разведение, при котором ДНК воспроизводимо выявляется (в двух повторах) |
| 3 | Эффективность ПЦР | Прирост матрицы на каждом цикле амплификации | Эффективность ПЦР должна быть не ниже 90%. Это соответствует значению наклона линейной области зависимости Ct от логарифма концентрации ДНК-матрицы (slope): не ниже - 3,6 (приемлем диапазон slope 3,1 - 3,6) | Для оценки эффективности ПЦР проводится амплификация с рядом десятикратных разведений целевой ДНК (пункт 2 настоящей таблицы) в двух повторах каждое. По результатам амплификации строится график зависимости Ct от логарифма концентрации ДНК матрицы. Определяется наклон линейной области (slope). Эффективность ПЦР оценивается по уравнению: Е = [10(-1 /slope)]-1, в идеальном случае - при удвоении количества ПЦР продукта за один цикл: Е = 100%, (slope = -3,32) |
| 4 | Предел обнаружения ПЦР- тест-системы (LOD) | Минимальное количество биологического искомого объекта в исследуемом образце, которое может достоверно обнаружить данный метод | Чем меньше искомого биологического объекта способен выявить метод, тем выше его чувствительность. Предел обнаружения ПЦР-тест-системы (LOD) должен составлять не более 0,1% | Готовится ряд модельных образцов с разным содержанием целевой матрицы. Готовятся образцы целевого ГИМР- ингредиента (от 5% до 0,001% содержания) в соответствующей матрице. Приготовленная панель исследуется с использованием ПЦР-методики. Определяется минимальное содержание ГИМР- ингредиента в тотальной ДНК организма, при котором ГИМР воспроизводимо выявляется (в десяти повторах) |
| 5 | Предел количественного определения (LOQ) | Наименьшее количество (концентрация) вещества в образце, которое может быть количественно оценено с использованием методики с требуемой правильностью и внутрилабораторной прецизионностью | Предел должен быть не более 0,1%. На пределе чувствительности относительное стандартное отклонение (RSD) не должно превышать 20%. Истинное значение измеряемой величины должно входить в полученный при измерениях доверительный интервал | Исследуется 10 повторов 0,1% ГИМР-стандарта по ПЦР-методике. Рассчитывается среднее значение содержания ГИМР в образце и относительное стандартное отклонение (RSD). Сравнивается рассчитанное стандартное отклонение (RSD) с критерием 20%. Также оценивается вход истинного значения в доверительный интервал полученного среднего значения |
| 6 | Аналитическая область (dynamic range) | Интервал определяемых аналитических характеристик, в котором получаемые результаты имеют приемлемый уровень правильности и прецизионности, приемлем диапазон 0,1% - 5% | Диапазон 0,1% - 5% экспериментальных данных, должен удовлетворять линейной модели (пункт 7 настоящей таблицы) | Проводятся исследования образцов с различным содержанием ГИМР. Оценивается линейность зависимости аналитического сигнала |
| 7 | Линейность | Наличие линейной зависимости аналитического сигнала в анализируемой пробе в пределах аналитической области методики. Оценивается как R2 коэффициент корреляции, определяющий верность модели линейной зависимости Ct от логарифма концентрации калибровочных образцов | R2 коэффициент для калибровочных образцов должен быть не менее 0,98% | Исследуется в двух повторах 0,1%, 1,0% и 5% калибровочные ГИМР-стандарты по ПЦР-методике. Строится калибровочная прямая (dCt от lgC), оценивается коэффициент корреляции данных с линейной зависимостью (R2) |
| 8 | Правильность | Отклонение среднего результата определений от значения, принимаемого за истинное | Методика дает корректные результаты, если значения, принимаемые за истинные, лежат внутри доверительных интервалов соответствующих средних результатов анализов, полученных экспериментально по данной методике | Готовятся образцы из калибровочных стандартов 0,1%, 1,0% и 5% с добавлением матриц различного происхождения, для чего стандарты смешиваются с другими ингредиентами (сухим молоком, мясным фаршем, рыбной мукой). Исследуются образцы по ПЦР-методике в двух повторах. Оценивается вход истинного значения в диапазон погрешности полученного среднего значения для каждого образца |