Действует с 1 марта 2021 г.
Приложение. Критерии эффективности методики идентификации ГИМЖ
Срок действия
Действует до 1 марта 2027 года (п. 2 приказа). С 1 марта 2027 г. не действует. Открыть документ на 01.03.2027 →
Ниже текст действующей редакции.
| № | Характеристика | Описание характеристики | Критерий | Методы оценки критерия |
| 1 | Специфичность ПЦР | Способность ПЦР-тест-системы выявлять только целевую ДНК | ПЦР-тест-система должна выявлять целевую ДНК. ПЦР-тест-система не должна давать ложноположительных результатов, в том числе выявлять ДНК близкородственных и неродственных биологических видов в 100% проводимых исследований | Для оценки специфичности используются контрольные панели образцов. В состав панели должны входить образцы, содержащие целевую ДНК и не содержащие целевую ДНК |
| 2 | Чувствительность ПЦР | Наименьшее содержание копий целевой ДНК, которое может быть определено с использованием данной ПЦР- методики в зависимости от свойств используемых праймеров и зондов | Чувствительность должна быть не ниже 100 копий целевой ДНК в одной ПЦР-реакции | Проводятся исследования ряда десятикратных разведений целевой ДНК с известной концентрацией в двух повторах каждое. Определяется максимальное разведение, при котором ДНК воспроизводимо выявляется (в двух повторах) |
| 3 | Эффективность ПЦР | Прирост матрицы на каждом цикле амплификации | Эффективность ПЦР должна быть не ниже 90%. Это соответствует значению наклона линейной области зависимости Ct от логарифма концентрации ДНК-матрицы (slope): не ниже 3,6 (приемлем диапазон slope 3,1 - 3,6) | Для оценки эффективности ПЦР проводится амплификация с рядом десятикратных разведений целевой ДНК (пункт 2 настоящей таблицы) в двух повторах каждое. По результатам амплификации строится график зависимости Ct от логарифма концентрации ДНК-матрицы. Определяется наклон линейной области (slope). Эффективность ПЦР оценивают по уравнению: Е = [10(-1/slope)] - 1, в идеальном случае - при удвоении количества ПЦР продукта за один цикл: Е = 100% (slope = - 3,32) |